Procesos biotecnológicos para la proliferación y enraizamiento in vitro de palo santo Bursera graveolens (Kunth) Triana&Planch, provenientes del bosque seco de la provincia de Loja

Abstract

Bursera graveolens, “palo santo”, es una especie forestal representativa y de importancia en el bosque seco de la provincia de Loja, que está desapareciendo debido a la deforestación, conversión de uso del suelo, pastoreo intensivo del ganado caprino principalmente, incendios forestales y otras causas antrópicas. La especie de Bursera graveolens, ha sido utilizada desde épocas remotas como remedio para curar dolores estomacales, sudoríficos y como linimento para el reumatismo, la madera seca es utiliza como incienso. Actualmente uno de los usos industriales de la especie es la extracción de aceites esenciales, que los obtienen principalmente de los frutos. Por lo indicado, se hace necesario investigar nuevas técnicas que permitan elevar la tasa de multiplicación de la especie, siendo la micropropagación vegetal, una de las herramientas alternativas para conservar la especie, por medio de técnicas de cultivo in vitro, que permite propagar individuos y disponer de material vegetativo de especies vegetales, bajo condiciones controladas. En esta perspectiva se realizó la presente investigación titulada: “Procesos biotecnológicos para la proliferación y enraizamiento in vitro de palo santo Bursera graveolens (Kunth) Triana & Planch provenientes del bosque seco de la provincia de Loja” con la finalidad de conocer los factores fisiológicos y ambientales, que influyen en la propagación in vitro de la especie, desarrollando para ello ensayos de laboratorio que contempla la desinfección de semillas y explantes de campo, germinación in vitro de semillas, multiplicación de explantes provenientes de plántulas obtenidas de invernadero e inducción de callos embriogénicos, contribuyendo de esta manera el establecimiento de protocolos de propagación in vitro de la especie forestal en estudio La investigación se desarrolló en el marco del proyecto de investigación: “Generación de protocolos para la propagación in vivo e in vitro de genotipos élites de especies forestales nativas y promisorias para la reforestación en la región sur del Ecuador" desarrollado por la Universidad Nacional de Loja, en el Laboratorio de Micropropagación Vegetal. La investigación de tesis se desarrolló en dos fases: la fase de campo comprendió la recolección del material vegetal en la comunidad de Malvas, del cantón Zapotillo; y, la fase de laboratorio; se llevó a cabo en el Laboratorio de Micropropagación Vegetal de la Universidad Nacional de Loja, durante el periodo comprendido entre noviembre 2013 hasta enero del 2015. En los experimentos de laboratorio, se utilizó el medio de cultivo basal MS (Murashige y Skoog 1962), suplementado con diversos reguladores de crecimiento. En el ensayo de desinfección de semillas se empleó hipoclorito de sodio (cloro comercial) en tres concentraciones (25, 50 y 75 %), en tres tiempos de inmersión (5, 10 y 15 min) respectivamente, donde el tratamiento con 75 % hipoclorito de sodio durante 5 minutos, fue el mejor para controlar la contaminación. Para la germinación in vitro de semillas se aplicó cuatro métodos pre-germinativos (testigo, física, mecánica y química) con tres concentraciones de AG3 (0; 0,5 y 1 mg/l), encontrándose el mayor porcentaje de germinación de 11,11 %, en el tratamiento de escarificación mecánica y la adición de 0,5 mg/L de AG3. . Para la desinfección e implantación in vitro de explantes de campo, se realizó la colecta del material vegetal en el cantón Zapotillo, la desinfección se realizó empleando hipoclorito de sodio (cloro comercial) en tres concentraciones (15, 20 y 25 %), con dos tiempos de inmersión (5 y 10 min) respectivamente, los tratamientos aplicados no permitieron controlar contaminación de los explantes de campo. Para el ensayo de multiplicación in vitro se utilizó tres citocininas: benzilaminopurina (BAP), kinetina (KIN) e iso-pentiladenina (2ip), en dos concentraciones 1 y 2 mg/l respectivamente, resultando la benzilaminopurina (BAP) en concentración 1 mg/l el mejor tratamiento. Para los ensayos de brotamiento y enraizamiento in vitro de explantes (ápices caulinares y segmentos nodales), no se pudo dar cumplimiento a este objetivo debido a la falta de material aséptico. En el primer proceso de inducción de callos embriogénicos utilizando 2,4-D en concentraciones (0, 1, 1,5 y 2 mg/l), los mejores resultados se obtuvieron con la adición de 1 mg/l 2,4-D; pues se obtuvo el 35,56 % de formación de callos embriogénicos. Para el segundo proceso de inducción de callos embriogénicos empleando las auxinas 2,4-D, Dicamba, ANA y AIA en tres concentraciones (0,1; 0,5 y 1 mg/l) respectivamente, se alcanzó el mejor resultado con 1 mg/l 2,4-D, se logró inducir el mayor porcentaje de formación de callos embriogénicos (63,33 %).