Procesos biotecnológicos In Vitro para la formación de callos a partir de tejidos foliares de cafeto (Coffea arabica L.)

Abstract

La presente investigación se desarrolló en el campo y una fase de laboratorio dentro el período comprendido entre mayo 2015 enero 2016. En el campo se realizó la recolección del material vegetal en un sector cafetalero de la parroquia Nambacola perteneciente al cantón Gonzanamá de la provincia Loja. En el laboratorio de micropropagación vegetal se llevó a cabo dos fases de laboratorio las cuales comprendieron la desinfección del material vegetal traído del campo y la segunda fase en la aplicación de auxinas y citoquininas para la formación de callos. Para la primera fase de desinfección se aplicó hipoclorito de calcio en tres concentraciones (15, 20 y 25 %) y en dos tiempos de inmersión (10 y 20 min), estableciendo un diseño completamente al azar con un arreglo factorial de 3x2, con seis tratamientos y tres repeticiones evaluando la contaminación de los explantes. El análisis mostró interacción entre el hipoclorito de calcio y el tiempo de inmersión, obteniendo el tratamiento con menor porcentaje de contaminación el T5 (25 % Ca (ClO)2 + 10 min) con valor de 37,62 % con diferencias significativas frente al T2 (15 % Ca (ClO)2 + 20 min) y T4 (20 % Ca (ClO)2 + 20 min), que presentaron una contaminación de 86,19 %; 74,76 % respectivamente. Destacando que los tratamientos T1, T3, Y T6 no mostraron diferencias significativas de porcentaje de contaminación. En la segunda fase para a la formación de callos in vitro de explantes, se utilizó la mezcla de dos hormonas de crecimiento, la auxina: 2,4-ácido diclorofenoxiacético (2,4 -D) en concentraciones de 1,0; 3,0; 3,0 y 6,0 ppm y una citoquinina: benziladenina (BAP), en tres concentraciones 3,0; 10,0; 0,0 y 0,0 ppm respectivamente, para lo cual se estableció un diseño completamente al azar, donde se evaluó la formación de callo en explantes de Coffea arabica L. El tratamiento con mayor porcentaje de callo fue el T1 (1,0 ppm 2,4-D +3,0 ppm BAP), el cual se lo obtuvo mediante el análisis de varianza (ANOVA) que determino que los tratamientos presentaron alta variabilidad entre ellos. De la misma manera la prueba de Tukey, mostró diferencias significativas entre tratamientos con una p = < 0,05. Cabe destacar que los tratamientos sin citoquininas (BAP) no presentaron formación de callo. Según los días evaluados la aparición de encallamiento se evidenció al veinteavo día de evaluación para los tratamientos T1 y T2 con porcentajes del 60 y 20 % respectivamente, mientras que los T3 y T4 no presentaron ningún valor para este indicador. El encallamiento se estabilizó a los 30 días de evaluación en los T1 y T2 llegando a alcanzar valores de 73,33 y 26,67 % respectivamente, por otro lado los tratamientos T3 y T4 no se presentaron formación de callos. Los callos obtenidos mostraron formación homogénea y no homogénea, tomando en cuenta solo los explantes que formaron callos presentando porcentajes en el T1 (1,0 ppm 2,4-D +3,0 ppm BAP) valores de 66,7 y 33,33 de callo homogéneo y no homogéneo respectivamente, frente al T2 (3,0 ppm 2,4-D +10,0 ppm BAP) que presentó un 100 % de callo no homogéneo. En el presente trabajo de investigación se generaron protocolos de desinfección y propagación in vitro en la especie Coffea arabica L., para contribuir con estudios para futuras investigaciones in vitro en la propagación de cafeto. Palabras clave: Coffea arabica L., in vitro, propagación.