Procesos biotecnológicos para la inducción de callos a partir de vitroplantas de Cinchona officinalis l., a nivel de laboratorio en la provincia de Loja.

Abstract

Cinchona officinalis L., es una especie endémica del Valle de Loja en la Región Sur del Ecuador, fue considerada como uno de los principales productos forestales económicamente importante desde el punto de vista medicinal. En el siglo XVIII hasta XIX, debido a la sobre-explotación, comercialización y a la alteración de su ecosistema, las poblaciones de Cinchona officinalis L., fueron amenazadas; actualmente la regeneración natural de las poblaciones es baja, aunque todavía pueden encontrar individuos aislados en potreros, formando pequeños relictos boscosos, ubicados en pendientes pronunciadas. A través de la utilización de metodologías alternativas (procesos biotecnológicos), el cultivo de tejidos vegetales constituye una herramienta que puede dar solución a problemas naturales e inducidos que presentan algunas especies forestales, mediante la técnica de cultivo in vitro se puede propagar tejidos a gran escala e incrementar el número de plantas en menor tiempo; así como conservar recursos fitogenéticos que presentan dificultades para propagarse y mantenerse en su medio natural. En este contexto la propagación de Cinchona officinalis L., se realizó con el propósito de generar información sobre la germinación in vitro y la inducción de callos, a partir de vitroplantas de Cinchona officinalis L., con fines de conservación. La presente investigación se desarrolló en el Laboratorio de Micropropagación Vegetal de la Universidad Nacional de Loja, como parte del proyecto marco “Identificación y descripción del estado actual de Cinchona officinalis L., en la provincia de Loja y generación de protocolos para la propagación in vivo e in vitro”. Para la fase de implantación (desinfección y germinación), fase de inducción de callos y fase de inducción de embriones, se utilizó el medio de cultivo basal de MS (Murashige y Skoog, 1962), agregando diferentes reguladores de crecimiento. Para el ensayo de desinfección de semillas se aplicó hipoclorito de sodio al 50 % (NaClO) y peróxido de hidrogeno al 2 % (H2O2) en dos tiempos de inmersión (5 y 10 minutos), donde la utilización de 50 % de NaClO y 2 % de H2O2 durante 5 y 10 minutos respectivamente, controlaron eficientemente la contaminación (0,0%). Por otra parte, el efecto de desinfección con NaClO 50 % y H2O2 2 % durante 5 minutos, más la adición de 1,0 mg/l de AG3 al MS líquido, resultó efectivo sobre el porcentaje de germinación de semillas de Cinchona officinalis L., obteniendo resultados del 86,67 % y 80 % de germinación respectivamente. Para la fase de inducción de callos a partir de segmentos nodales de Cinchona officinalis L., los explantes se cultivaron en medio de MS sólido, suplementados con auxinas y citoquininas en diferentes concentraciones: 2, 4-D en concentraciones de 1,0; 2,0 y 3 mg/l, y BAP en una concentración de 0,5 mg/l. Se observó que la combinación de dos sustancias de reguladores de crecimiento es necesaria para la obtención de mejores porcentajes de formación de callo. Así, con el uso solo de auxinas, se obtuvo un 51,67 % de formación de callos con una concentración de 1 mg/l de 2.4-D (T1). La combinación de auxinas y citoquininas resultó ser la más efectiva, obteniéndose 65, 00 % de formación de callos con la combinación de 1,0 mg/l 2,4-D + 0,5 mg/l BAP (T4); los resultados dependieron de la concentración de auxina/citoquinina empleada. Para la fase de inducción de embriones a partir de callos de Cinchona officinalis L., los callos se cultivaron en medio de MS sólido suplementado con auxinas y citoquininas en diferentes concentraciones: 2, 4-D en una concentración de 1,0 mg/l, y KIN en una concentración de 0,5 mg/l. Se observó que la combinación de sustancias reguladoras del crecimiento es necesaria para la obtención de mejores porcentajes de formación de embriones. Pues, cuando los callos se cultivaron en MS sin hormonas (T1), la formación de embriones fue del 15,00 %. Cuando se añadieron auxinas (2,4-D) en una concentración 0,1 mg/l, la formación de embriones fue del 17,00 % (T2). Al combinar auxinas y citoquininas resulto ser la más efectiva, obteniéndose 28,33 % de formación de embriones con la combinación de 1 mg/l 2,4-D + 0,5 mg% KIN (T3). Palabras claves: Cinchona officinalis L., desinfección, germinación in vitro, callos, embriones.