Cultivo de amebas del género Acanthamoeba ATCC 30010 con enfoque al estudio de virus nucleocitoplasmáticos de ADN de gran tamaño

Abstract

El género Acanthamoeba comprende diferentes especies de amebas de vida libre, se aíslan con frecuencia de distintas fuentes ambientales como agua y suelo; y a menudo son usados en laboratorio para el estudio de otros organismos. Amebas como Acanthamoeba castellanii son un importante reservorio de virus, conocidos por proteger a estos organismos de duras condiciones ambientales, considerándose un hospedador viral por excelencia, en particular de virus gigantes, los cuales pueden ser aislados mediante la inoculación directa de cultivos de A. castellanii con muestras ambientales. En este estudio, se ha establecido protocolos de cultivo en condiciones de laboratorio para A. castellanii ATCC 30010 a fin de comprender la respuesta de estos microorganismos a interacciones de depredación con virus. Se desarrolló y aplicó un enfoque para la viabilidad de este género en medio líquido (PYG) y medio sólido no nutritivo utilizando como sustrato Escherichia coli ATCC 25922. Para la identificación de virus gigantes se trabaja por medio de cocultivos, donde se inoculó 100 µl de células de A. castellanii en medio PYG enriquecido con antibióticos y muestras de agua de lagunas de la ciudad de Loja, en placas de 96 pocillos. Se establecieron cultivos axénicos de amebas, donde se verificó el estado en trofozoítos de las células, así como la presencia de vacuolas, obteniéndose entre 90-100 % de confluencia celular. En cuanto a los cocultivos, se logró observar efectos citopáticos en las células infectadas por la potencial presencia de virus gigantes en las lagunas muestreadas. Para estudios posteriores se podría llegar a nivel molecular y determinar las cepas aisladas, además de determinar las interacciones virus-hospedero, sus razones evolutivas e implicaciones ambientales.